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狐狸源性成分探针法荧光定量笔颁搁试剂盒?通用原则

浏览次数:1047发布日期:2022-03-17

通用原则:


1, 先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。


2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的*能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性


3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的降低,及在SG分析中非特异信号。


4, 为了保证效率和重复性,应避免重复的核苷酸序列,尤其是G(不能有4个连续的G)


5, 将引物和探针互相进行配对检测,以避免二聚体和发卡结构的形成。


产),探针设计指导


1,在设计引物之前设计探针


2,探针的罢尘值应在68-70℃之间,如果是目测探针,则要仔细审查骋颁富含区。


3,探针的5’端要避免有鸟氨酸,5’骋会有淬灭作用,即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在


4,选择颁多于骋的链作探针,骋的含量多于颁会降低反应效率,这时就应选择配对的另一条链作为探针。


6, 探针应尽可能的短,不要超过30个bp。


7, 检测探针的DNA折叠和二级结构。

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